Атенуирана вакцина укључује употребу живог инфективног агенса чија је вирулентност ослабљена, тако да више није патогена за људе.
Ове вакцине су генерално снажније у изазивању заштитног имунитета од инактивираних вакцина. У ствари, атенуирани инфективни агенс је још увек у стању да се реплицира, чак и ако је у одређеним границама, да би опонашао праву инфекцију.
Атенуирани инфективни агенс се добија фаворизовањем његовог раста у ћелијским линијама (вирусима) или медијумима културе (бактерије), како би се смањио његов капацитет раста у људским ћелијама. Главни проблем са овом врстом вакцине је да атенуација можда није стабилна, тако да се микроорганизми могу вратити на вирулентност.
Вакцине за оспице, заушке, полиомијелитис (Сабинова вакцина) и жуту грозницу састоје се од живих и ослабљених вируса.