Да би се одржао правилан баланс између слободних радикала и антиоксидативних система, важно је да се тело стално снабдева адекватним залихама молекула са антиоксидативним својствима споља, како би се спречило да природна одбрана против радикала, састављена од антиоксидантне баријере, истекне. остављајући биомолекуле изложене агресији реактивних врста које угрожавају њихову функционалност.
Молекули са антиоксидативним дејством, који се могу узимати уз исхрану кроз конзумирање хране богате овим супстанцама, или путем циљане суплементације, бројни су и укључују полифеноле, витамине, каротеноиде и многе друге супстанце. Ова једињења су у стању да реагују са слободним радикалима смањујући њихову реактивност и стварајући мање опасне молекуле које тело може лако елиминисати.
Такође је важно узети у обзир да антиоксиданти делују са различитим механизмима и различитом ефикасношћу у зависности од типа радикала који је укључен у реакцију. Сваки антиоксидант је, у ствари, способан да спроведе сопствено контрастно деловање на неколико специфичних радикала, тако да је неопходно да снабдевање егзогеним антиоксидантима буде што је могуће различитије, тако да различити молекули могу да делују на комплементаран начин или у синергија у заштити биомолекула од оксидације узроковане радикалним врстама различите природе.
У том смислу, фокус истраживања је био на истраживању механизама којима антиоксиданти штите ћелије. Посебно је значајна могућност мјерења количине антиоксиданата унесених у дијету или дјелотворности антиоксидантне баријере, како би се било које ризичне ситуације могле исправити на циљани начин.
Главна потешкоћа у мерењу антиоксидативне ефикасности супстанце је у чињеници да су слободне радикале укључене у одређивање оксидативног стреса бројне и да реагују са биомолекулама са различитим брзинама и механизмима. Због различите природе слободних радикала, изузетно је тешко идентификовати методу анализе која омогућава да се једнозначно мери способност једињења да се супротстави оксидационом деловању реактивних врста, посебно када се ради о комплексним матрицама као што су крв, храна или биљни екстракти. У ствари, слободни радикали се разликују по реактивности, у типу циљног биомолекула, у биолошкој матрици у којој делују и у хемијско-физичком афинитету (липофилном или хидрофилном окружењу), као иу механизму којим се генеришу.
Осим тога, да би се упоредили измерени подаци за различите супстанце, важно је покушати стандардизовати методе које се користе колико год је то могуће. Идеалан аналитички метод треба да буде пре свега једноставан и лако репродуцибилан, да би се гарантовала добра поновљивост резултата. Штавише, требало би да користи значајне биолошке радикале, који реагују јасним и познатим механизмима, како би се ин витро што више симулирало оно што се дешава у телу, минимизирајући интерференцију. Коначно, идеалан тест треба да буде разноврстан како би се омогућило мерење и хидрофилних и липофилних супстанци.
Тренутно не постоји јединствена валидна метода за мјерење антиоксидацијске снаге споја, која одговара описаним карактеристикама. Стога је неопходно користити комбинацију резултата неколико есеја заснованих на механизмима и на различитим радикалним врстама, како би се постигао компромис, који узима у обзир и коначну употребу самих резултата.
Утврдити шта желимо да меримо и зашто је важно не само за избор најпогоднијих метода мерења, већ и за коришћење најприкладнијег протокола за екстракцију, јер антиоксиданти представљају веома велику фамилију једињења са веома различитим хемијско-физичким карактеристикама. и не постоји техника екстракције која је способна да екстрахује све антиоксиданте присутне у комплексној матрици, а истовремено минимизира присуство потенцијалних ометача који могу нарушити резултате.
АНАЛИТИЧКЕ МЕТОДЕ
Најизравнији начин да се процени способност једињења да заштити ћелије и ткива од оксидативног стреса је мерење антиоксидативног капацитета крви након узимања самог једињења, тј. Ефикасности у јачању антиоксидативне баријере, која укључује све антиоксидативне супстанце присутне у крви. Развијени тестови генерално имају врло специфичне карактеристике и могу мјерити дјеловање одређеног типа антиоксиданта у добро дефинираним увјетима. Међутим, различити антиоксиданти који се налазе у крви не делују одвојено, већ спроводе стриктно међусобно повезану акцију како би се створила синергија која омогућава добијање оптималне заштите од агресије слободним радикалима. Према томе, стварно мерење укупног антиоксидативног капацитета не може се свести само на суму антиоксидативног капацитета појединачних компоненти, и немогуће је одредити свеукупно деловање антиоксидативних система у биолошким флуидима помоћу једног теста.
Алтернативни начин је ин витро мерење антиоксидативне моћи егзогених супстанци које се узимају са храном (храна и суплементи). У овом случају, међутим, мора се имати на уму да је то мера антиоксидативног потенцијала једињења, која даје само апроксимацију његове способности да спроведе право заштитно дејство у биолошким компартментима против агресије слободних радикала, пошто процењује квантитативно присутни антиоксиданти, али не дају никакве информације о њиховој биорасположивости и њиховој ефикасности када се унесу у организам.
Методе за мерење антиоксидативног капацитета могу се поделити у две категорије на основу механизма којим реагују са слободним радикалима да инактивирају своју реактивност:
- ХАТ (Хидроген Атом Трансфер) методе, које се заснивају на способности супстанце да изврши своје антиоксидативно дејство преношењем атома водоника на радикалне врсте;
- СЕТ (Сингле Елецтрон Трансфер) методе, које процењују способност супстанце да редукује слободне радикале преносом електрона.
Неки од коришћених аналитичких метода су у стању да делују са оба механизма.
На основу онога што је до сада речено, јасно је да је број тестова развијених за одређивање антиоксидативног и антирадикалног капацитета веома висок, тако да ћемо се у наставку ограничити на кратко илустровање најраширенијих и најзначајнијих, покушавајући да истакнемо њихове предности и ограничења. .
