општост
Имунофиксација је лабораторијски тест који омогућава идентификацију и типизацију гама глобулина присутних у биолошком узорку.
Детаљно, анализа омогућава проучавање - у крви или урину пацијента - класе имуноглобулина (ИгА, ИгГ, ИгМ, ИгЕ или ИгД) и тип капа или ламбда лаког ланца, према њиховој специфичној електрофоретској покретљивости. . Након тога, за идентификацију гама глобулина, имунофиксација укључује инокулацију специфичних антигена за фрагмент или одговарајуће антитело ( анти-имуноглобулински антисерум ): присуство сумњиве промене је потврђено формацијом талога, видљивог голим оком или микроскопом.
Ова информација је од велике важности за успостављање, нарочито, дијагнозе патологија плазма ћелија (гамопатије или дискразије плазма ћелија). Имунофиксација је веома корисна за процену и праћење мултиплог мијелома, Валденстромове макроглобулинемије и примарне амилоидозе (која се такође назива амилоидоза лаког ланца).
šta
Имунофиксација (или имуноелектрофореза, такође скраћена у акрониму ИФЕ ) је техника која може да одреди да ли је и која класа имуноглобулина (ИгГ, ИгМ, ИгА, ИгД, ИгЕ) или тип лаког ланца капа или ламбда присутна у вишак или дефект у крвном серуму и урину пацијента.
Каппа и ламбда лаки ланци карактеришу моноклонску компоненту, тј. Антитела са истом идентичном хемијском структуром.
Серум и уринарна имунофиксација: када је назначено?
Плазмацелуларне дисплазије или гамопатије су хетерогена група поремећаја непознате етиологије које карактеришу:
- Диспропорционална пролиферација клона Б ћелија ;
- Присуство у серуму и / или урину типа имуноглобулина (или његове полипептидне подјединице), структурно и електрофоретски хомогено ( моноклонално ).
Нормално, дисскрасије плазма ћелија се дијагностицирају електрофорезом серумских и уринарних протеина, након чега слиједи имунофиксација серума (ИФЕ).
Истовремено, може се прописати и тест крви за мјерење укупне концентрације имуноглобулина (ИгГ + ИгМ + ИгА).
Да бисте сазнали више: Имуноглобулини - шта су они, како се мере и референтне вредности »Имунофиксација: основни принцип
Имунофиксација је испитивање које укључује двије фазе (прво електрофорезу у агарозном гелу, затим имунопреципитацију са специфичним антисерумима ).
Први корак имунофиксације је исти као и код ЕЛЕКТРОФОРЕЗЕ протеина (или протидограма), па је потребно запамтити неки концепт:
- Електрофореза је лабораторијска анализа која омогућава одређивање количине протеина присутних у крвном серуму или другим биолошким узорцима и, за сваку фракцију, открива да ли постоје било какве аномалије у смислу квалитета. Посебно, овај преглед омогућава раздвајање протеина на пет група: албумин, алфа 1 глобулин, алфа 2 глобулин, бета глобулин и гама глобулин ; потоњи се детаљније истражују имунофиксацијом.
- Електрофореза је сепарациони метод заснован на различитој брзини миграције електрички набијених честица, кроз раствор и инертни носач, под утицајем електричног поља које генерише једносмерна струја. У пракси, испит користи електрични набој и молекуларну масу протеина присутних у узорку пацијента. Под импулсом електричног поља, ови макромолекули мигрирају и "групишу се" по типу, реагујући на стрес на карактеристичан начин. Резултат ( електрофоретско праћење ) састоји се од различитих врхова и кривина, којима одговарају фракције протеина. Нормално, први врх, већи и ужи, је албумин ; да би следили, посматрамо врхове глобулина, много нижи од албумина. Повећање или смањење амплитуде и интензитета пикова који се формирају на путу указују на веће или мање присуство протеина у свакој категорији; што је више протеина присутно у опсегу, већи је одговарајући пик. У случају гама глобулина, ако се жели знати количина сваке од различитих класа (ИгА, ИгМ, ИгГ итд.) Биће потребно прибјећи појединачној дози. Уопштено, што је више гама глобулина присутно у опсегу, већи је одговарајући пик; висина одговара укупној количини протеина који припадају одређеној категорији.
ИММУНОФИССАТИОН обезбеђује:
1) Електрофореза са Агарозним гелом : узорак пацијента (серум или урин) се депонује на електрофоретској траци, тј. На подлогу за миграцију (обично, агарозни гел). Примјеном електричног поља, генерираног истосмјерном струјом, добива се раздвајање у различитим тракама. У пракси, сваки тип гама глобулина присутан у смеши (тј. У узорку пацијента) мигрира на основу молекулске масе и електричног набоја. Различита електрофоретска покретљивост гама глобулина омогућава њихову идентификацију (свака од њих се поклапа са специфичним појасом на електрофоретском путу) и посматра аномалије.
2) Имунопреципитација са специфичним антисерумом (фиксација) : специфични антигени за специфично антитело или фрагмент се додају појединачно у сваку електрофоретску траку (анти-ИгГ, анти-ИгА, анти-ИгМ, анти-лигхт каппа или анти-ланац) ламбда лаки ланац). Ако је присутан моноклонални протеин, интеракција антигена са одговарајућим антителом ће произвести уски појас (то значи да је резултат позитиван) и формирање преципитата, видљивог голим оком или микроскопом. Коначно, узорак се обрађује (тј. Пере и боји) да би се уклонили протеини који се нису таложили, да би се постигло сушење гела и наставило са очитавањем резултата.
Зашто то ради
За шта је имунофиксација?
Имунофиксација серума је испит за дијагностицирање или праћење болести карактерисаних промјеном гама глобулина, посебно када се ради о производњи моноклонске компоненте ( моноклонска гамопатија ).
Да бисте сазнали више: Моноклоналне гамопатије - шта и које су »Имунофиксација је корисна у случајевима сумње на дискразију плазма ћелија и основна је за проучавање МИЕЛОМА (и сродних патологија) и МГУС (акроним за "моноклоналне гамопатије несигурног значења").
Овај тест нам такође омогућава да проценимо Валденстромову макроглобулинемију и амилоидозу лаког ланца ( АЛ ).
Имунофиксација: када се прописује преглед?
Индикација за имунофиксацију је услед клиничких или лабораторијских доказа који подстичу сумњу на промене моноклонских антитела или имуноглобулина у серуму или урину.
На пример, овај преглед омогућава продубљивање резултата серопротективне или уринарне електрофорезе: када се у електрофоретском праћењу траке које одговарају гама глобулинима одступају од нормалности, имунофиксација идентификује који од ових протеина је измењен, у смислу количине и квалитет.
Укратко, серумска имунофиксација се може прописати:
- У случају када други лабораторијски тестови дају абнормални резултат, у смислу одсуства или мање и веће количине протеина плазме у односу на норму;
- Када се сумња на присуство болести карактерисаних производњом моноклонске компоненте, као што су:
- Вишеструки мијелом и његове варијанте;
- Валденстромова макроглобулинемија;
- амилоидоза;
- Када пацијент развије симптоме и знакове који указују на присуство моноклонске гамопатије или мултиплог мијелома, као што су:
- Боне паинс;
- анемија;
- Еаси фатигуе;
- Повратне инфекције;
- Необјашњиви преломи.
У случају мултиплог мијелома, електрофореза протеина и имунофиксација су значајне за праћење напретка болести (праћење).
Имунофиксација: на које се узорке може извести?
Биолошки узорци који се могу подвргнути имунофиксацији су углавном:
- Серум (имунофиксација серума);
- Урин (имунофиксација урина);
- Текућина * (имунофиксација течности).
* Напомена : ЦСФ или цереброспинална течност је течност која прожима и штити мозак, кичмену мождину, кранијалне живце и кичмене корене.
Нормалне вредности
НЕГАТИВНИ резултат серумске и уринарне имунофиксације за моноклоналне или поликлоналне гама глобулине сматра се НОРМАЛНОМ .
Гамма глобулини
Гама глобулини чине 9-20% укупних протеина плазме.
- Референтна вредност Гамма глобулин : 0, 9-1, 4 г / дл
Што се тиче укупне концентрације имуноглобулина ( ИгГ + ИгМ + ИгА ), сматра се да су вредности између 600 и 2300 мг / дл нормалне.
- Референтна вредност Имуногобулини у серуму :
- ИгА : 90-400 мг / дл
- ИгГ : 800-1800 мг / дл
- ИгМ : 60-280 мг / дл
- ИгД : 0, 3-0, 4 мг / дл
- ИгЕ : 20-440 мг / дл
Напомена : Референтни интервал испитивања може мало варирати у зависности од старости, пола и инструментације која се користи у лабораторији за анализу. Из тог разлога, пожељно је консултовати опсеге који су наведени директно у извештају. Такође треба имати на уму да резултате анализе мора у целини оценити лекар опште праксе, који познаје историју болести пацијента.
Високе вредности - Узроци
Повећање гама глобулина може бити:
- Поликлонски, ако је производња имуноглобулина хетерогена, тј. Све компоненте гама-глобулина - које се производе или потичу од различитих плазма ћелија - утичу на повећање;
- Моноклонално, када су гама глобулини произведени или изведени из једног типа (клон) плазма ћелија.
Повећање поликлоналних гама глобулина може бити повезано са:
- Хроничне упалне болести;
- Реуматоидни артритис;
- Системски еритемски лупус;
- Хронична обољења јетре (као што су хепатитис и цироза);
- Акутне и хроничне инфекције;
- Рецент иммунизатионс;
- Неке болести тумора.
Високе вредности моноклоналних гама глобулина могу указивати, уместо на, присуство:
- Неке неоплазме и хроничне упале;
- Мултипле миелома;
- лимфом;
- Валденстромова макроглобулинемија.
Вишак гама глобулина назива се хипергамаглобулинемија, док је мањак познат као хипогамаглобулинемија .
Лов Валуес - Узроци
Смањење гама глобулина може указивати на присуство различитих болести имуног система на генетској основи, укључујући агамаглобулинемију, или секундарну имунодефицијенцију (нпр. АИДС, реналну инсуфицијенцију, акутну сепсу и Цусхингов синдром).
Смањење вредности гама глобулина може такође зависити од употребе цитостатичких лекова, имуносупресива и стероида.
Како се изводи
Имунофиксација серума
Имунофиксација у серуму укључује једноставну извлачење крви из вене руке. Серум се добија центрифугирањем биолошког узорка; ово, у ствари, омогућава да се фракција која садржи ћелије (корпускуларни део) раздвоји од течне крви (плазме). У крвном серуму нема фактора коагулације (фибриноген, фактор ВИИИ, фактор В и протромбин).
Уринарна имунофиксација
За обављање уринарне имунофиксације потребно је сакупити малу количину урина у посебну стерилну посуду. На основу индикација доктора и лабораторије, узорак се може сакупити без прецизног временског периода ( случајно ) или у року од 24 сата .
Имунофиксација ликера
Анализа захтева узимање мале количине цереброспиналне течности, кроз уметање игле, у спиналну шупљину ( лумбална пункција ).
припрема
Имунофиксација: како се припремате за испит?
- Прије узимања узорака крви, неке лабораторије могу захтијевати од вас да проматрате пост од најмање 10-12 сати. За то време дозвољена је мала количина воде.
- Имунофиксација се може извести на урин сакупљен у одређено доба дана (случајно) или током 24 сата, тако да је неопходно претходно добити одговарајуће стерилне контејнере.
- Што се тиче имунофиксације течности, уместо тога није потребна посебна припрема.
Шта може да промени исход испита?
Неки лекови могу да утичу на исход имунофиксације, па је препоручљиво да лекару пријавите било коју терапију која је у току.
У шест месеци пре прегледа, примена вакцина (имунизација) и употреба лекова, као што су фенитоин, прокаинамид, орални контрацептиви, метадон и терапеутски гама глобулин, могу повећати концентрацију имуноглобулина. Други лекови који могу да промене резултат теста су кортикостероиди, неомицин, ацетилсалицилна киселина и хлорпромазин.
Интерпретација резултата
Резултат имунофиксације се процењује у комбинацији са резултатима других анализа. Тумачење налаза је одговорност лекара опште праксе или референта који може да идентификује и упореди промене које утичу на специфични гама глобулин (на пример, трака која се поклапа са имуноглобулинима Г) на одређене болести. Ова процена потврђује или подржава дијагностичку хипотезу: у принципу, имунофиксација може открити нормалан профил гама глобулина или идентификовати моноклонални протеин или поликлонални модел .
Када се болест дефинише, имунофиксација се може извести за:
- Надгледајте болест током времена, а затим пратите њен ток (праћење);
- Проверите ефикасност терапијског протокола .
За и против имунофиксације
У поређењу са протеинском електрофорезом, имунофиксација:
- То је брже : резултати имунизације се обично добијају у року од три сата;
- Он је осетљивији (иако незнатно): имунофиксација може открити имуноглобулин искључен из електрофорезе протеина, посебно у ниским концентрацијама (мање од 1 грама / л).
Осим тога, имунофиксација:
- Може се делимично аутоматизовати ;
- Лако се чита и тумачи .
Међутим, имунофиксација је скупља од електрофорезе протеина и дозвољава само анализу гама глобулина .
Нормални резултат
У имунофиксацији, нормалан пут укључује:
- Трака која се поклапа са тамнијим имуноглобулином Г ( ИгГ );
- Трака која одговара најслабијем имуноглобулину А ( ИгА );
- Одсуство траке за имуноглобулин М ( ИгМ );
- Капа трака је гушћа од ламбда (лаки ланац), са односом 2: 1.
У нормалном резултату, траке су велике и постоји постепено и уједначено смањење густине боје према ивицама траке имуноелектрофорезе.
Поликлонални гама глобулини
У неким случајевима, све имунофиксационе траке су једнако замагљене у истој мери. Овај модел представља присуство поликлоналних имуноглобулина . Такође, у овом случају, траке су широке и прелазак на ивице имуноелектрофоретске траке је постепен. ИгМ опсег - обично одсутан - је широк.
Моноклонални гама глобини
Када се на путу имунофиксације може идентификовати уски појас са оштрим ивицама, то значи да је потрага за моноклоналним компонентама позитивна .
Идентификација моноклоналног имуноглобулина је корисна у дијагностици следећих стања:
- Моноклонална гамопатија неодређеног значаја (МГУС);
- Мултипле миелома;
- Валденстромова макроглобулинемија;
- Амилоидоза.
Осим тога, имунофиксација се може користити за праћење терапије у дискразији плазма ћелија (тј. Мултипли мијелом и Валденстромова макроглобулинемија). Ако се ниво моноклонског протеина смањује или се не може детектовати након хемотерапије, може указати на одговор на третман . Насупрот томе, моноклонални протеин који остаје упркос третману је знак рефракторне болести .
Имајте на уму . Резултат негативне имунофиксације не искључује увек дисскрасију плазма ћелија. На пример, не-секреторни мултипли мијелом или олигосекретори могу дати негативне резултате како у урину тако иу серуму. Према томе, ако је дијагностичка сумња на гамопатију још увек висока, показано је одређивање односа Каппа / Ламбда Либере лаких ланаца ( К / Л однос ).
Имунофиксација и дијагноза мултипле склерозе
Имунофиксација цереброспиналне течности (течности) се прописује када лекар сумња на присуство мултипле склерозе . У овом случају, пут који је одређен је карактеристичан, јер наглашава присуство такозваних олигоклоналних трака . Резултат је приказан у извјештају лабораторије као позитиван . Треба имати у виду да се траке нормално не посматрају у серумској имунофиксацији, јер оне корелирају са производњом интратекалних гама глобулина .
Међутим, треба напоменути да овај налаз не потврђује нужно дијагнозу, јер се друга стања могу појавити код олигоклоналних трака у цереброспиналној течности.
Другим речима, идентификација олигоклоналних трака са имунофиксацијом течности је веома корисна за подршку дијагнози мултипле склерозе, али мора бити потврђена другим истраживањима . Други услови који могу да доведу до овог резултата су упале централног нервног система, укључујући: енцефалитис ХИВ-а, неуросифилис, неуросаркоидозу, Лајмски менингоенцефалитис, ЦНС малигне болести, оптички неуромијелитис и трансверзални мијелитис.
