проба

Тест за мерење антиоксидативне снаге

Есеј АБТС

То је аналитички метод који користи спектрофотометријско мерење за одређивање антиоксидативног капацитета узорка. Употребом УВ-Вис спектрофотометра, измерена је апсорпција раствора који садржи радикал АБТС • +, генерисан оксидацијом АБСТ-а (2, 2'-азинобис (3-етилбензотиазолин-6-сулфонат), безбојна супстанца у облику радикали су обојени апсорпцијом на карактеристикама таласних дужина у видљивом опсегу. Додавање решења АБТС • + антиоксидативних молекула, који могу да делују преношењем и водоника и електрона, одређује редукцију радикала у безбојну форму, Ово избјељивање, пропорционално количини присутног антиоксиданта, може се мјерити као смањење апсорпције током одређеног времена на одређеној таласној дужини (734 нм). Антиоксидативна снага се изражава у поређењу са вредности апсорбанције измерене за познате количине молекула антиоксиданта изабраног као референтни стандард, који је обично аскорбинска киселина или Тролок (у овом случају говоримо о антиоксидативној активности ТЕАЦ Тролок Екуивалент Антиокидант Цапацити.

Мерење антиоксидативне снаге засновано на употреби АБТС-а има предност што је једноставна и брза. Штавише, омогућава мерење антиоксидативних супстанци и хидрофилних и липофилних у широком опсегу пХ. Међутим, мора се имати на уму да коришћени радикал (АБТС • +) није физиолошки и није присутан у биолошким системима и да се често истичу проблеми поновљивости мерења због кинетике реакција различитих укључених антиоксиданата.

ФРАП (антиоксидацијска моћ смањења жељеза)

ФРАП тест мери способност редукције антиоксиданата против иона гвожђа. То је метода заснована на трансферу електрона, у којој иони гвожђа прелазе из Фе3 + у Фе2 +. Под одређеним условима пХ (3.6) и у присуству ТПТЗ (2, 4, 6-трис (2-пиридил) -с-триазина), ови јони формирају комплексе са различитим карактеристикама, посебно редукованим дериватом (Фе2 +) -ТПТЗ) претпоставља плаву боју која има максималну апсорпцију на 593 нм која се може мерити спектрофотометријски. Капацитет редукције антиоксидантне супстанце се стога може мерити као промена у апсорпцији раствора који садржи оксидант на таласној дужини утврђеној поређењем са варијацијом у односу на стандард (нпр. Аскорбинска киселина).

ФРАП тест је дизајниран да мери снагу редукције плазме, али је затим прилагођен да тестира капацитет антиоксиданата чистих једињења и комплексних матрица. У ствари, пошто овај метод омогућава процену само редукционог капацитета преносом електрона, потпуно игноришући дејство антиоксиданата који делују преко преноса водоника, не дозвољава се мерење доприноса молекула, као што су тиоли и протеини, који играју улогу антиоксиданата. у биолошким текућинама (нпр. у крви). Предност ове методе је у томе што је она једна од најједноставнијих, најбржих и најјефтинијих метода за одређивање антиоксидативног капацитета ин витро.

ДППХ ТЕСТ

2, 2-дифенил-1-пикрилхидразил (ДППХ •) је веома стабилан и комерцијално доступан радикал азота, карактерисан интензивном љубичасто-црвеном бојом, која се смањује када се редукује у присуству молекула са антиоксидативним капацитетом. Спектрофотометријским мерењем на 517 нм промене апсорпције раствора ДППХ после реакције са једињењем антиоксиданса, могуће је квантификовати редукциони капацитет испитиване супстанце да ли он делује са преносом водоника или преносом електрона. Резултат је генерално изражен као ИЦ50, тј. Количина антиоксиданта способног да смањи почетну концентрацију ДППХ за 50%.

Ово је брз, једноставан и јефтин метод. Границе ове аналитичке технике дате су могућношћу да су резултати анализе искривљени у случају када се испитивани молекули апсорбују у истом опсегу таласних дужина ДППХ радикала или у присуству великих молекула који су стерилно збијени и не они реагују са реактивним делом радикала. Ово доводи до тога да ДППХ реагује са антиоксидансима до 1000 пута спорије него пероксил радикали.

ПЦЛ ТЕСТ (фотокемилуминисценција)

ПЦЛ тест се заснива на реакцији специфичних врста радикала, супероксидног аниона (О2 • -), који је фотокемијски генерисан УВ зрачењем, са једињењем које може емитовати хемилуминесценцију. Коришћени маркер је луминол, молекул који када се оксидује слободним радикалима емитује светлост која се може мерити посебним инструментом (Пхотоцхем®). Присуство антиоксидативних супстанци у смеши оброка деактивира радикалне врсте које инхибирају емисију хемилуминесценције. ПЦЛ анализа је веома брза и осетљива. Осим тога, уз примену два различита аналитичка протокола, названа АЦВ (Антиоксидативни капацитет растворљиви у води) и АЦЛ (топиви у антиоксидативном капацитету липида), допринос укупном антиоксидативном капацитету водотопиве компоненте (флавоноиди, витамин Е) може се измерити за исто једињење. Ц, аминокиселине итд.) Него липосолубилне (токофероли, токотриеноли, каротеноиди, итд.). Антиоксидативни капацитет испитиваног производа се добија поређењем вредности забележених са мерењима која се односе на стандардне референтне молекуле, аскорбинску киселину за АЦЛ протокол и Тролок за АЦВ протокол.